深圳科软KR仿手工甩干式不堵孔洗板机之PCR扩增产物的检测分析
科软仿手工甩干式全自动洗板机是传统洗板机和传统甩干机的有机组合的一体机。相对传统洗板机而言,其最大特点是:1、不用人工拍板;2、不会堵针;3、故障低;4速度快。
不吸液:删除吸液针等吸液系统,利用旋转和重力去液。
无污染:水平放板,旋转向下甩液,保证最大程度去液。独特锅底状接液设计,极难反溅。独有的防污染预处理洗板程序。
免拍板:微孔内无残留,洗好后不用人工拍板。免除拍板给环境和使用者造成的不利影响。
不堵孔:无吸液针,极大地降低堵孔风险。注液针防堵孔处理,实现注液针不堵孔。闲时管路自动清洗,避免结晶堵塞。开关机自动维护,保证管路内畅通无阻。
不撞针:注液针不移动,与微孔板保持足够距离,有效保护酶标板和孔内包被。
可条洗:每块板可以任选条数进行清洗,节省洗液,保护环境。
速度快:一次可洗1—6块板,KR306洗好6块板约4分钟。
PCR扩增产物的检测分析
P C R 反应混合物经过循环扩增后,所需做的工作就是检测反应液中是否存在预期扩增产物以及产物的特异性。目前已经发展了许多检测分析P C R 扩增产物的方法。包括凝胶电泳、高压液相色谱、核酸探针杂交、探针捕获酶免疫反应分析、酶切图谱分析、单链构型多态性分析、核酸序列分析等。
其中凝胶电泳是检测P C R 扩增产物最常用和最简便的方法。
几乎所有的核酸实验都需要进行凝胶电泳,它是分离、鉴定和提纯D N A 的标准方法之一。限制性酶切图谱分析及S o u th e rn杂交分析都是在凝胶电泳基础上进行的。电泳能按分子量大小分离核酸分子,而且操作简便、用途广泛。凝胶电泳检测P C R 反应产物,能迅速确定有无预期的扩增产物以及扩增产物的分子量大小。用溴化乙锭(E B )染色凝胶中的D N A ,直接在紫外光下观察,可检测出凝胶中少至l n g 的D N A 6凝胶电泳主要有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种常用类型。在这里我们简要介绍一下前一种。
琼脂糖凝胶电泳检测P C R 产物最常用的琼脂糖浓度为1%〜1 . 5 % ,不同浓度的凝胶分f N D A 的有效范围不同。在输血医学中琼脂糖凝i 电泳较常用,具体操作如下:
( 1 )配制1 % 〜1 . 5 %琼脂糖凝胶称取适量琼脂糖,加人适量0. 5 X T B E,置微波炉反复煮沸若干次;
( 2 )补充挥发水分;
( 3 )加溴乙锭(10mg/ml)至终浓度0. 5|ug/ml,混匀,室温冷却;
( 4 )取电泳板,选择合适梳子安放至适当高度;
( 5 )琼脂糖冷却至60€左右,倒板;
( 6 )室温聚合30min以上;
( 7 )置电泳槽,加0.5XT BE缓冲液,拔出梳子,预电泳5min,冲洗加样孔;
( 8 )取D N A样品1^1,加6 X 加样缓冲液M ,蒸馏水4fil,混匀,点样。
( 9 )电泳 6V/cm,约 30min;
( 10 )紫外灯下观察结果。